神經膠質細胞表征
神經膠質細胞，如星形膠質細胞、小膠質細胞和少突膠質細胞，在中樞神經系統(tǒng) (CNS) 中起著重要的作用，如保持體內穩(wěn)態(tài)、主動參與突觸生成，或保護和支持神經元。最近，神經膠質細胞在健康和疾病中的作用變得越來越關鍵，目前已開發(fā)出了以神經膠質細胞為中心的新研究工具和方法?，F在，研究者們認識到，神經膠質細胞培養(yǎng)是基礎和轉化醫(yī)學研究的重要工具，原代培養(yǎng)或 iPSCs 與人類疾病研究的關聯性也日益加深。但是，現有模型在很大程度上局限于終點形態(tài)學和免疫組化法。得益于技術工具和體外轉化模型的發(fā)展，神經膠質細胞研究為神經膠質細胞生長、形態(tài)學、功能及其最終在 CNS 疾病中的作用提供了更多啟示。
關鍵優(yōu)勢
定量分析神經膠質細胞的生長、形態(tài)學和藥理學作用
使用動力學、高通量測定來監(jiān)測不同大腦區(qū)域的動態(tài)生物學
圖 1. 通過對大腦區(qū)域星形神經膠質細胞進行長時監(jiān)測揭示細胞生長和形態(tài)學的差別。將皮質、海馬體和小腦星形膠質細胞以 2,000 個細胞/孔的密度接種到 96 孔板中。監(jiān)測細胞的增殖和形態(tài) 10 天。圖像中顯示融合了 30-40% 的細胞培養(yǎng)物（皮質膠質細胞為 2 天，海馬體或小腦膠質細胞為 4 天），其中量化了分支形態(tài)學表型（粉色和棕色 mask）。時間進程曲線比較了大腦區(qū)域中的細胞生長，表明皮層的星形膠質細胞生長速率最快。本案例中比較了神經膠質細胞隨時間推移產生的分支，小腦星形膠質細胞的分支在 96 小時達到最高 (68.3 ± 1.8)，其次是海馬體 (50.6 ± 1.5) 和皮質 (12.3 ± 0.7)。同時也顯示了每個加樣孔中的最高分支（變異性圖）。數據表示為平均值 ± SEM（24 次重復測定），圖像為10倍物鏡采集。
離子霉素對小腦星形膠質細胞的藥理學作用
圖 2. 離子霉素誘導的鈣增加對小腦星形膠質細胞生長和健康的影響。小腦星形膠質細胞以 10,000 細胞/孔的密度接種到 96 孔板上，使用鈣離子載體離子霉素 (0.01-10 μM) 處理進行處理，以細胞健康分析試劑 Incucyte? Annexin V NIR (Sartorius; 0.5%) 作為培養(yǎng)基補充。監(jiān)測細胞的增殖和健康狀態(tài) 10 天。時間進程曲線顯示了離子霉素對細胞生長的動力學影響。濃度響應曲線比較了離子霉素對細胞生長和健康的影響，結果顯示細胞融合的濃度呈濃度依賴性下降，細胞凋亡呈濃度依賴性增長，證明離子霉素具有細胞毒性。典型圖像顯示了離子霉素在 24 小時內對細胞生長（明場）和細胞健康 (NIR) 的影響。數據表示為平均值 ± SEM（3 次重復測定），圖像為10倍物鏡采集。
多重分析以獲得更深入的見解
使用不產生干擾的試劑監(jiān)測細胞周期進展、細胞調節(jié)和細胞活性，解析復雜的調節(jié)過程。
圖 3. 岡田酸 (OKA) 誘導的細胞周期阻滯與星形膠質細胞株的細胞凋亡有所區(qū)別。將表達 Incucyte?細胞周期綠/橙色慢病毒的 T98G 星形膠質細胞，以 4,000 個細胞/孔的密度接種到 96 孔板中。在細胞健康分析試劑 Incucyte? Annexin V NIR (0.5%; Sartorius) 存在的前提下，用蛋白磷酸酶抑制劑 OKA (50-0.14 nM) 處理細胞，測定其對細胞周期阻滯和細胞活性的影響。使用 Incucyte? Cell-by-Cell 分析模塊獲取10倍物鏡的細胞圖像，以單獨劃分細胞，并顯示空白和 OKA 處理 2 天的代表性相差和/或熒光（綠色、橙色、近紅外）視頻。時間進程曲線顯示了空白或 OKA 組中處于 S|G2|M 期（綠色）或 G1 期（橙色）的細胞群，以及Annexin V NIR 陽性細胞群（近紅外）的百分比。結果表明，OKA (5.56 nM) 從 16 小時開始導致 S|G2|M 期細胞停滯，效應一直維持到約 36 小時后（凋亡細胞數量開始增長）。濃度響應曲線顯示了 OKA 20 h 對不同時相細胞群的快速作用，以及 48 h 對細胞存活率的延遲效應（Annexin V NIR 陽性）。數據表示為平均值± SEM（6 次重復測定）
可視化和定量神經膠質細胞的運動
通過全自動分析測量實時細胞運動，以實時評估損傷后的細胞情況
圖 4. 不同大腦區(qū)域中星形神經膠質細胞損傷后遷移和藥理學抑制作用。將原代（皮質、海馬體、小腦）或 iPSC (CDI, Fujifilm) 星形膠質細胞以 30,000 細胞/孔的密度接種到 Incucyte? Imagelock 96 孔板中，使用 Incucyte? Woundmaker 制作準確、可重復的劃痕。使用 Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)獲取圖像。視頻顯示了海馬體神經膠質細胞在損傷后 3 天內的遷移情況，分段圖像顯示了初始的劃痕（藍色 mask）和愈合過程中的劃痕（淺黃色 mask），可進行細胞形態(tài)學評估。時間進程曲線比較了不同大腦區(qū)域的損傷愈合速度，結果顯示小腦星形膠質細胞遷移最快。在藥理學研究中，星形膠質細胞損傷前用離子霉素 (10 - 0.01 μM) 培養(yǎng)，觀察到濃度依賴性遷移抑制 (IC50 = 1.67 μM)。數據表示為平均值± SEM（24 次重復測定）
通過全自動分析實時定量神經膠質細胞的趨化性
圖 5. T98G-WT 星形細胞向胎牛血清 (FBS) 趨化性遷移。T98G-WT 細胞以 1,000 細胞/孔的密度放置在事先涂覆有 PDL (0.1 mg/mL) 的 Incucyte? ClearView 96孔趨化板的頂腔內。一旦細胞粘附，在腔底部加入胎牛血清 (FBS; 10% - 0.12%) 作為趨化物。圖像和各自的 mask代表在添加 FBS 后 48 小時膜的頂側和底側的細胞情況。48 小時的時間進程曲線和柱狀圖表明，隨著 FBS (EC50 = 3%) 水平的增加，通過孔隙的趨化性遷移存在濃度依賴性增強效應。數據表示為平均值± SEM（10 次重復測定）
利用生理學相關的神經膠質細胞模型
在單一培養(yǎng)或共培養(yǎng)環(huán)境中，利用相關細胞模型（iPSC 衍生細胞或原代細胞）研究神經膠質細胞的支持功能，以評估星形膠質細胞的支持功能
圖 6. iPSC 星形膠質細胞在神經元共培養(yǎng)環(huán)境中可增強神經突的發(fā)育并穩(wěn)定神經網絡活性。將人 iPSC 衍生的神經元進行單一培養(yǎng)或與星形膠質細胞共培養(yǎng)（神經元為 25,000個 細胞/孔，星形膠質細胞為 10,000個細胞/孔；Talisman Therapeutics）。分別用 Incucyte? Neurolight 或 Neuroburst Orange (Sartorius) 感染神經元，以評估神經突發(fā)育，或監(jiān)測自發(fā)的神經元活動隨時間的變化。時間進程曲線顯示，與單一培養(yǎng)相比，共培養(yǎng)細胞發(fā)育出的神經突分支更大，生長更好（NL：147 ± 2.5 vs. 72 ± 2.5 mm/mm2，分別培養(yǎng)了 228 小時）。跡線表示視野內所有活性對象的鈣水平波動。柱形圖顯示了 23 天內活動對象的定量分析、相關性（連接性）、突發(fā)速率和持續(xù)時間。與單一培養(yǎng)相比，共培養(yǎng)能夠產生更多的活性物質，降低了持續(xù)鈣事件的頻率，表明共培養(yǎng)神經網絡穩(wěn)定，而連接性則不受培養(yǎng)環(huán)境的影響。結果表明，iPSC 星形膠質細胞具有支持功能。在共培養(yǎng)環(huán)境下，神經元表現出增強的形態(tài)學表型，并能夠發(fā)育出功能更成熟的網絡。數據表示為平均值 ± SEM（24 次重復測定）
訂購信息
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產品 | 數量 | 商品目錄號 |
|---|---|---|
Incucyte? 趨化分析軟件模塊 | 單個 | 9600-001 |
Incucyte? ClearView 96孔趨化板 | 單個 | 4582 |
Incucyte? 劃痕分析軟件模塊 | 單個 | 9600-0012 |
Incucyte? 細胞遷移組合包 | 單個 | 4493 |
Incucyte? 細胞遷移/細胞侵襲組合包 | 單個 | 4474 |
Incucyte? Imagelock 96 孔板 | 單個 | 4378 |
Incucyte? 細胞周期紅/綠色慢病毒試劑 | 1 瓶 (0.2 mL) | 4779 |
Incucyte? 細胞周期綠/橙色慢病毒試劑 | 1 瓶 (0.2 mL)) | 4809 |
Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件模塊 | 1 個模塊 | 9600-0031 |
