用于通過離子交換 (IEX) 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室規(guī)模生物分子純化的靈活層析解決方案
離子交換 (IEX) 是一種重要的分離技術(shù),廣泛用于研究實(shí)驗(yàn)室和生物制藥行業(yè)。建議根據(jù)不同分子的凈電荷,將它們用于各種生物分子的純化和精純,包括抗體、其他蛋白質(zhì)、核酸和病毒等。
Sartobind? IEX 膜層析濾器有多種即用型形式可供選擇,可更大限度地縮短蛋白純化實(shí)驗(yàn)和其他生物分子實(shí)驗(yàn)中過濾的設(shè)置時(shí)間。
實(shí)驗(yàn)室規(guī)模 IEX 層析產(chǎn)品
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立即聯(lián)系層析專家IEX 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化的主要考慮因素
陰離子和陽離子交換配基應(yīng)分別用于捕獲帶凈負(fù)電荷或正電荷的分子。
離子交換配基
在選擇 IEX 化學(xué)配基時(shí),了解緩沖液 pH 值與目標(biāo)生物分子的凈電荷之間的關(guān)系非常重要。當(dāng)選擇了用于純化的緩沖系統(tǒng)并且分子 pI 已知時(shí),您會(huì)發(fā)現(xiàn)在陰離子交換 (AEX) 或陽離子交換 (CEX) 之間進(jìn)行選擇是多么簡單。
已經(jīng)選擇了適合您的化學(xué)配基?
離子交換緩沖液
應(yīng)選擇 IEX 的純化緩沖液,以確保目標(biāo)生物分子的穩(wěn)定性。對于僅在高于或低于其 pI 的 pH 值下穩(wěn)定的分子,這也就決定了您需要使用的配基類型(分別為 AEX 或 CEX)。如果穩(wěn)定性不重要(例如,您的蛋白質(zhì)變性并在純化后會(huì)重新折疊)或分子在其 pI 兩側(cè)的較寬 pH 范圍內(nèi)保持穩(wěn)定,則應(yīng)根據(jù)您的偏好選擇 AEX 或 CEX 緩沖液。
需要一些指導(dǎo)或 IEX 緩沖液建議嗎?
IEX 純化緩沖液應(yīng)確保生物分子的穩(wěn)定性,并適合所選的膜層析化學(xué)配基。
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常見問題解答
離子交換膜層析是一種分離技術(shù),它使用離子交換配體根據(jù)凈電荷的微小差異來純化生物分子。它的工作原理與柱層析類似,但離子交換配體偶聯(lián)到由大孔膜而不是微孔樹脂組成的固定相上。這樣可以更快地純化和提高帶電分子(如抗體、其他蛋白質(zhì)、肽、核酸和病毒)的產(chǎn)量。
Sartobind? IEX Lab 和 Vivapure? IEX 均提供季銨 (Q) 和二乙胺 (D) 陰離子交換劑或磺酸 (S) 陽離子交換劑。
離子交換廣泛適用于許多目標(biāo)分子。它可用于抗體、其他蛋白質(zhì)、核酸和病毒的捕獲純化或流通精純,基于其獨(dú)特的凈電荷。還推薦使用離子交換層析法去除聚集體、宿主細(xì)胞蛋白 (HCP) 和 DNA,以及清除病毒和內(nèi)毒素。
一個(gè)、兩個(gè)或四個(gè)單元、一對魯爾到 UNF 適配器和一份快速入門指南。
8 個(gè)或 24 個(gè)單位、16 或 48 個(gè)流通管和洗脫液收集管以及快速入門指南。
是的。雖然我們已采取措施,通過在產(chǎn)品包裝中提供快速入門指南來更大限度地減少對環(huán)境的影響,但如果您需要有關(guān)如何使用我們產(chǎn)品的更多信息,可以從我們 eShop 的相關(guān)產(chǎn)品頁面下載完整的說明手冊。
Sartobind? IEX Lab 可以在有或沒有設(shè)備的情況下使用。注射 泵或蠕動(dòng)泵 可直接連接到魯爾鎖入口,以更短的設(shè)置時(shí)間實(shí)現(xiàn)快速純化?;蛘?,包括一對適配器,以便與大多數(shù)液相色譜系統(tǒng)兼容。
柱床體積也稱為膜體積 (MV)。有多種柱床體積可供選擇,以適應(yīng)一系列篩選和制備純化應(yīng)用:
- Vivapure? IEX 迷你型:0.24 mL
- Vivapure? IEX Maxi:2.7 毫升
- Sartobind? IEX 實(shí)驗(yàn)室:0.41、2.1 或 2.8 mL
這些層析單元在大多數(shù)常見的純化緩沖液中是穩(wěn)定的。應(yīng)避免使用氧化劑。有關(guān) pH 兼容性的更多信息(因化學(xué)成分和暴露時(shí)間而異),請參閱說明手冊。
與填料層析法不同,氣泡不會(huì)破壞 Sartobind? 膜。這樣就無需對緩沖液進(jìn)行脫氣,節(jié)省了大量的制備時(shí)間。
為了獲得更優(yōu)的生物分子捕獲效果,我們建議使用與待純化樣品成分相似的緩沖液進(jìn)行平衡。這是一個(gè)快速的過程,只需幾秒鐘的純化周期。
盡管 Sartobind? 膜具有抗堵塞性,但我們建議在上樣前對所有樣品進(jìn)行預(yù)過濾。為了更大限度地提高分析效率,可以將 Minisart? 針頭式過濾器 連接到 Sartobind? IEX Lab 進(jìn)樣口,以便同時(shí)進(jìn)行預(yù)過濾和樣品加載。
使用 Vivapure? IEX 純化的小體積樣品可以使用 Vivaclear 離心過濾器 或 Minisart? 針式過濾器快速預(yù)過濾。
應(yīng)進(jìn)行偵查純化以確定更優(yōu)捕獲和洗脫條件。當(dāng)通過離心機(jī)、注射器或泵進(jìn)行純化時(shí),使用離子強(qiáng)度逐漸增加的緩沖液進(jìn)行多步洗脫。如果使用液相色譜系統(tǒng),則應(yīng)用線性洗脫梯度。然后,應(yīng)使用適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ?SDS PAGE)來分析流出液和洗脫液餾分,并確定哪些條件可提供所需的純度水平。
應(yīng)針對每種生物分子優(yōu)化純化方法,考慮緩沖液 pH 值和電導(dǎo)率以及目標(biāo)的等電點(diǎn) (pI) 等特性。如果優(yōu)化后結(jié)合載量仍然不足,可以串聯(lián)使用 2 至 4 個(gè) Sartobind? IEX Lab ?;蛘撸梢岳酶吡魉?,在單個(gè)裝置上通過多個(gè)循環(huán)純化具有多個(gè)較小負(fù)載的樣品。
雖然 Vivapure? IEX 專為一次性使用而設(shè)計(jì),但每個(gè) Sartobind? IEX Lab 都可以多次重復(fù)使用。通過適當(dāng)?shù)脑偕蛢?chǔ)存,結(jié)合載量可以維持至少 100 個(gè)循環(huán)。
我們建議對每個(gè)目標(biāo)生物分子使用單獨(dú)的 Sartobind? IEX Lab ,以消除殘留風(fēng)險(xiǎn)。