如果知道尋找的目標(biāo)細(xì)胞，則在培養(yǎng)中跟蹤細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞增殖會(huì)相對(duì)容易。最簡(jiǎn)單的細(xì)胞生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)方法是追蹤培養(yǎng)物向細(xì)胞匯合的進(jìn)展。匯合度可指示孔或孔板被細(xì)胞覆蓋的百分比。匯合度是日常維持細(xì)胞系和基于細(xì)胞的檢測(cè)中（例如轉(zhuǎn)染）有效的指標(biāo)。但是，在需要計(jì)算絕對(duì)細(xì)胞數(shù)量的情況下，匯合度不是有效指標(biāo)。在這些情況下，可以使用 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析軟件進(jìn)行無標(biāo)記追蹤，或核標(biāo)記試劑追蹤細(xì)胞增殖情況。每個(gè)成像的細(xì)胞核將同于一個(gè)細(xì)胞?；罴?xì)胞分析系統(tǒng)可進(jìn)行匯合度和細(xì)胞數(shù)量的系列測(cè)定。

對(duì)于多核細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞核數(shù)量則不是測(cè)定細(xì)胞數(shù)量的合適方法。但是，細(xì)胞增殖分析的細(xì)胞匯合度讀數(shù)可以報(bào)告細(xì)胞集群總體生物量的增加 - 這項(xiàng)讀數(shù)可能已足夠用于一些細(xì)胞密度/匯合度影響較大的應(yīng)用（例如轉(zhuǎn)染）。

基于 DNA 合成的細(xì)胞增殖分析涉及到在 DNA 復(fù)制中使用人工 DNA 堿基，將人工堿基整合到新形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，然后采用抗 BrdU 抗體對(duì)這些堿基染色，獲得在 BrdU 孵育期間，細(xì)胞分裂數(shù)量的大致估計(jì)。BrdU 染色分析需要固定細(xì)胞，因此不適于下游應(yīng)用。

活細(xì)胞分析在維持恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境的情況下，能夠監(jiān)測(cè)增殖速率和細(xì)胞形態(tài)，有助于更深入了解細(xì)胞增殖過程。此外，Incucyte^? 細(xì)胞增殖檢測(cè)不需要使用染料或標(biāo)記進(jìn)行匯合度測(cè)定，因此細(xì)胞也適用于下游分析。

在共培養(yǎng)環(huán)境中監(jiān)測(cè)細(xì)胞增殖需要無干擾型標(biāo)記（不干擾細(xì)胞的正常分裂過程）和可監(jiān)測(cè) 2 種熒光染料的方法。使用 Incucyte^? Nuclight 紅色和綠色試劑進(jìn)行核標(biāo)記的過程簡(jiǎn)單直觀。使用紅色或綠色試劑轉(zhuǎn)導(dǎo) 2 個(gè)細(xì)胞群，然后接種細(xì)胞，進(jìn)行共培養(yǎng)，接著追蹤每種類型細(xì)胞的增殖過程。這種活細(xì)胞分析可記錄共培養(yǎng)背景下的增殖過程，同時(shí)追蹤單個(gè)細(xì)胞或多個(gè)孔板的整個(gè)生長(zhǎng)階段，具有顯著的優(yōu)勢(shì)。隨著 Incucyte^? Cell-by-Cell 分析軟件的引入，有多種方法可以鑒別共培養(yǎng)細(xì)胞，例如，使用抗體標(biāo)記表面表位。在共培養(yǎng)中，只需要標(biāo)記一種細(xì)胞類型，然后利用分類工具鑒別集群中的細(xì)胞亞群（根據(jù)平均強(qiáng)度、大小或形狀分類）。

當(dāng)然，您可以在體外共培養(yǎng)環(huán)境中，研究復(fù)雜組織樣關(guān)系中的細(xì)胞相互作用，而在這些共培養(yǎng)細(xì)胞中，您可以通過細(xì)胞凋亡和膜完整性標(biāo)記物追蹤細(xì)胞死亡過程。為獲得最有意義的數(shù)據(jù)，細(xì)胞增殖和死亡可在同一培養(yǎng)環(huán)境中使用活細(xì)胞成像進(jìn)行同時(shí)監(jiān)測(cè)。

要在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中跟蹤特定的細(xì)胞類型，可采用一種顏色的 Nuclight? 試劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)，同時(shí)需確保它與所用的 Cytotox 試劑顏色不同。細(xì)胞生長(zhǎng)并結(jié)合成為密集且相互作用的培養(yǎng)物，可使用 Cytotox 或 Caspase 3/7 試劑監(jiān)測(cè)細(xì)胞死亡。

注：所有死亡或垂死細(xì)胞對(duì)于 Cytotox 或 Caspase 3/7 試劑呈陽性（不僅僅是用 Nuclight 轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞）。

匯合度和細(xì)胞數(shù)量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)對(duì)于某些涉及正常、健康細(xì)胞分析的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用極為重要，而團(tuán)塊生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)形成多層厚苔狀細(xì)胞團(tuán)，不適合采用光學(xué)方法評(píng)估匯合度或細(xì)胞數(shù)量。匯合度評(píng)估的前提是細(xì)胞生長(zhǎng)為單層結(jié)構(gòu)，只在兩個(gè)維度接觸其他細(xì)胞。細(xì)胞增殖與細(xì)胞計(jì)數(shù)的多重檢測(cè)需要核染色試劑，非單層細(xì)胞可能無法完全接觸試劑，造成細(xì)胞群染料吸收不佳。被多層細(xì)胞遮擋的細(xì)胞無法使用光學(xué)系統(tǒng)正確可視化處理，進(jìn)而造成信號(hào)模糊或信號(hào)丟失。為獲得理想結(jié)果，應(yīng)使用單層細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞增殖分析。

健康細(xì)胞核與凋亡細(xì)胞核的形態(tài)變化明顯，可以方便地進(jìn)行目視檢測(cè)。細(xì)胞開始凋亡時(shí)，細(xì)胞核開始固縮、變小，顏色變深。最終，細(xì)胞核解體成碎片（核碎裂）。在細(xì)胞增殖分析中，可以為活細(xì)胞核和凋亡細(xì)胞核進(jìn)行設(shè)門。此外，如果將視覺追蹤系統(tǒng)用于活細(xì)胞分析，則可以與細(xì)胞毒性或細(xì)胞凋亡聯(lián)合進(jìn)行多重分析，這兩項(xiàng)分析可以指示細(xì)胞膜是否被破壞，或者細(xì)胞是否已開始進(jìn)入凋亡級(jí)聯(lián)。

詳細(xì)了解細(xì)胞毒性分析

詳細(xì)了解細(xì)胞凋亡分析