概述
使用 Incucyte? Cell-by-Cell 分析解答有關(guān)貼壁或非貼壁細(xì)胞模型的更多問題
即使最簡單的細(xì)胞系統(tǒng)也存在很大的異質(zhì)性。借助 Incucyte? S3 和 Cell-by-Cell 分析模塊，您可以在培養(yǎng)箱中實時定量活細(xì)胞的細(xì)胞異質(zhì)過程及其帶來的影響，使用我們獨特便捷的活細(xì)胞成像和分析方法，研究細(xì)胞亞群在活化或分化過程中的動力學(xué)、表型變化，或了解細(xì)胞亞群對治療的響應(yīng)。
Incucyte? S3 活細(xì)胞分析系統(tǒng)、Cell-by-Cell 分析軟件模塊和 Incucyte? 試劑提供了全新的端到端解決方案，可在 96 孔板中進(jìn)行異質(zhì)性細(xì)胞培養(yǎng)的高通量分析。
主要功能和優(yōu)勢
功能 | 優(yōu)勢 |
借助先進(jìn)的軟件算法，識別高對比度相差圖像中的單個貼壁或非貼壁細(xì)胞 | 實現(xiàn)對總細(xì)胞群的無標(biāo)記定量 |
使用我們專用的向?qū)杰浖ぷ髁鞒?，基于形態(tài)或熒光對細(xì)胞進(jìn)行分類 | 將細(xì)胞亞群表型與功能或健康狀況輕松聯(lián)系起來，為研究工具（例如單細(xì)胞基因組學(xué)分析）提供補充性功能數(shù)據(jù) |
專有的無干擾試劑，可檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)、功能或健康狀況 | 能夠?qū)罴?xì)胞進(jìn)行多重動力學(xué)分析 |
細(xì)胞保持固定，而我們獨特的移動光學(xué)系統(tǒng)則能夠移動光學(xué)元件，以便觀察視野內(nèi)特定區(qū)域的細(xì)胞群動態(tài)變化 | 在圖像采集過程中，細(xì)胞保持在視野內(nèi) |
由您的組織培養(yǎng)箱提供不間斷培養(yǎng) | 在整個實驗過程中，通過一致的生理相關(guān)環(huán)境減少偽影 |
自動化圖像采集和分析，能夠在 96 孔規(guī)格下生成大量數(shù)據(jù) | 實現(xiàn)穩(wěn)定的藥理學(xué)分析。篩選候選治療藥物，或在更短的時間內(nèi)研究更多變量 |
完整的端到端解決方案，包括儀器、軟件和試劑 | 縮短故障排除所用的時間，從而投入更多時間進(jìn)行研究 |
Cell-By-Cell
Cell-by-Cell 分析方案簡介
動態(tài)了解細(xì)胞亞群的生物學(xué)表型
將 Incucyte? Cell-by-Cell 分析方案應(yīng)用于異質(zhì)性細(xì)胞群（例如 PBMC、免疫或腫瘤制劑），以研究單個細(xì)胞亞群的動態(tài)行為，然后通過將數(shù)據(jù)與疾病狀態(tài)、進(jìn)展和治療效果相關(guān)聯(lián)來獲得深入的了解。動態(tài)觀察分化或活化過程以了解亞群隨時間的調(diào)控和轉(zhuǎn)變，并確定對混合細(xì)胞群體特定細(xì)胞類型的治療機制。
關(guān)鍵優(yōu)勢
研究細(xì)胞亞群的動態(tài)變化并與活化或分化等過程結(jié)合
在不受干擾的微環(huán)境中定量分析混合培養(yǎng)物中表達(dá)的標(biāo)志物或形態(tài)的細(xì)胞特異性表型變化
補充現(xiàn)有工作流程
- 使用獨特的 Cell-by-Cell 圖像分析工具和活細(xì)胞試劑，從數(shù)千張圖像中輕松生成動力學(xué)數(shù)據(jù)
- 研究由已鑒別細(xì)胞亞群得到的功能動力學(xué)數(shù)據(jù)，并與總細(xì)胞群數(shù)據(jù)進(jìn)行比較
圖 1. 追蹤與 T 細(xì)胞活化相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞參數(shù)的變化。基于活化 T 細(xì)胞的細(xì)胞增大和形態(tài)變化進(jìn)行亞群分類。 將 PBMC 用抗 CD3 和 IL-2 或溶媒對照進(jìn)行處理，并用 Incucyte? S3 監(jiān)測隨時間的變化。 ?(A-D) 活化誘導(dǎo)平均細(xì)胞面積和離心率（所有細(xì)胞）發(fā)生時間依賴性增加。 ?注意離心率的變化先于面積的增加。 ?Cell-by-Cell 面積分布 (E) 和密度圖 (F-H) 突出顯示了活化后異質(zhì)性隨時間的增加，以及具有高離心率的大細(xì)胞群的出現(xiàn)。顯示的值為 12 個孔的平均值 ± SEM。
圖 2. 分析活化 T 細(xì)胞亞群：CD71 上調(diào)。(A-C) Cell-by-Cell 密度圖顯示 CD71（經(jīng) FabFluor-488 標(biāo)記）熒光在活化 T 細(xì)胞中隨時間和細(xì)胞面積（相）的增加而增加。 ?(D) 活化后 CD71+ 細(xì)胞（而非 CD4+ 細(xì)胞）比例的動態(tài)變化。(E) 亞群分析顯示，與小細(xì)胞 (< 110 mm2) 相比，大細(xì)胞 (> 100 mm2) 中的 CD71 表達(dá)優(yōu)先上調(diào)。這些數(shù)據(jù)證明 CD71 表達(dá)發(fā)生活化誘導(dǎo)的時間依賴性增加，并且細(xì)胞大小與 CD71 之間存在強關(guān)聯(lián)，在活化 4 天后，> 90% 的大細(xì)胞表達(dá) CD71。
圖 3. 在 Incucyte? S3 上，通過細(xì)胞鑒別和分類進(jìn)行免疫表型驗證。使用流式細(xì)胞術(shù)或使用 FabFluor-488 標(biāo)記抗體的活細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)分析，對來自 3 例供體的新鮮分離的 PBMC 中的六種 CD 標(biāo)志物和 IgG 對照進(jìn)行表征。 ?考慮到來自 3 例供體的平均值 (A) 或單獨供體的各個值 (B)，在兩種方法之間觀察到強相關(guān)性。
圖 4. 在 Incucyte? S3 上使用 Cell by Cell 分析對各種細(xì)胞類型中的 HER2 表達(dá)進(jìn)行表型分析。使用 FabFluor-488 標(biāo)記抗體對 A549、SKOV-3 或 SkBr3 細(xì)胞的 HER2 表達(dá)進(jìn)行表征。圖像（頂行）和熒光定量（底行）表明，A549 細(xì)胞中缺乏 HER2 表達(dá)，SKOV-3 細(xì)胞中發(fā)生異質(zhì)性表達(dá)，SkBr3 細(xì)胞中則發(fā)生均一的高水平表達(dá)。同型對照響應(yīng)代表陰性細(xì)胞群。
圖 5. 生成適用于藥理學(xué)研究的穩(wěn)定的細(xì)胞周期階段數(shù)據(jù)。在順鉑或 5-氟尿嘧啶 (5FU) 處理后，對表達(dá) Incucyte? 細(xì)胞周期紅色/綠色慢病毒試劑 (INSERT LINK) 的 HT1080 纖維肉瘤細(xì)胞中的細(xì)胞周期階段分布進(jìn)行定量。第 24 h 時的響應(yīng)顯示于細(xì)胞圖像中（輪廓示出由 Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件鑒別出的單個細(xì)胞）(A)。經(jīng)順鉑處理后，處于 G1 期（綠色熒光）的細(xì)胞百分比以濃度和時間依賴性方式降低 (B)，處于 S/G2/M 期（紅色熒光）的細(xì)胞百分比則以濃度和時間依賴性方式增加 (C)，與其已知的干擾有絲分裂的作用機制一致。經(jīng) 5FU 處理后，處于 G1 期的細(xì)胞百分比增加 (E)，處于 S/G2/M 期的細(xì)胞百分比降低 (F)，與 5FU 對 DNA 合成的已知影響一致。濃度響應(yīng)曲線（D 和 G）顯示出第 24 h 時化合物對細(xì)胞周期的所有可檢測階段的影響。
圖 6. 追蹤細(xì)胞亞群中的細(xì)胞健康：經(jīng)喜樹堿（CPT，細(xì)胞毒性化合物）或環(huán)己酰胺（CHX，細(xì)胞抑制化合物）處理后，HT1080 纖維肉瘤細(xì)胞凋亡的時程。利用 Incucyte? Nuclight 紅色試劑（細(xì)胞核活力標(biāo)記物）和無干擾 Incucyte? Caspase 3/7 綠色試劑（細(xì)胞凋亡指示劑）的多重讀數(shù)確定細(xì)胞健康狀況。細(xì)胞圖像顯示出第 24 h 時的響應(yīng)，并帶有相關(guān)的分類遮蔽（A 和 E）。使用 Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件工具，基于紅色和綠色熒光對細(xì)胞亞群進(jìn)行分類（B 和 F）。經(jīng) CPT 處理后，紅色細(xì)胞群減少，指示活細(xì)胞損失；紅色和綠色熒光增加，指示早期凋亡；且綠色熒光增加，指示晚期凋亡 (C)。經(jīng) CHX 處理后，未發(fā)生細(xì)胞凋亡 (G)。顯示了早期凋亡細(xì)胞群的濃度響應(yīng)時程（全部細(xì)胞中表現(xiàn)出紅色和綠色熒光的細(xì)胞百分比，D 和 H）。顯示的值為 3 個孔的平均值 ± SEM。
工作流程顯示了使用 Incucyte?? Cell-by-Cell 分析軟件模塊區(qū)分單個細(xì)胞并使用標(biāo)記細(xì)胞的面積、離心率或熒光強度對細(xì)胞亞群進(jìn)行分類所采取的典型步驟。使用 Incucyte? Annexin V NIR 染料檢測在化合物處理情況下隨時間推移的死亡細(xì)胞總數(shù)。通過高級無標(biāo)記分類分析軟件模塊，可實現(xiàn)利用總細(xì)胞形態(tài)的附加功能。
比較
與傳統(tǒng)技術(shù)的比較
Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)和 Cell-by-Cell 分析軟件模塊可深入洞察結(jié)果，提高分析效率，補充了現(xiàn)有單細(xì)胞分析技術(shù)的短板：
| Incucyte? Cell-by-Cell | 流式細(xì)胞儀 | 高內(nèi)涵成像 | 延時顯微鏡 | |
生物學(xué)信息 | ||||
在單個細(xì)胞水平上提取特征 | ? | ? | ? | ? |
細(xì)胞群、亞群和異質(zhì)性分析工具 | ? | ? | ? | 取決于制造商 |
活細(xì)胞、“無干擾”方案 | ? | ? （對于某些應(yīng)用） | ||
長期、全面的環(huán)境控制 | ? | |||
單細(xì)胞追蹤 | 取決于制造商 | |||
空間/形態(tài)學(xué)見解 - 圖像和視頻 | ? | ? | ? | |
長時間分析 | ? | |||
分析效率 | ||||
微孔板通量 | ? | ? | ? | |
自動化采集和分析 | ? | 取決于制造商 | ||
驗證數(shù)據(jù)
驗證數(shù)據(jù)
圖 7. 在異質(zhì)（混合）培養(yǎng)物和 Cell-by-Cell 分析中鑒別出的細(xì)胞。使用 FabFluor-488 標(biāo)記抗體對混合 B 細(xì)胞/T 細(xì)胞培養(yǎng)物中的 CD 表面標(biāo)記物 CD45 和 CD20 進(jìn)行表征。(A) 所示比例的混合細(xì)胞群的 Incucyte? Vessel 視圖（黃色 = 抗體標(biāo)記的細(xì)胞）。注意與標(biāo)記兩種細(xì)胞類型的 CD45 相比，隨著 R:J 比率的增加，CD20 標(biāo)記 (Ramos) 的細(xì)胞的比例更大。(B) 混合培養(yǎng)物中表達(dá)百分比的 Incucyte? Cell-by-Cell 定量分析。(C) CD20+ 細(xì)胞計數(shù)時程，顯示出混合培養(yǎng)物內(nèi) CD20+ 細(xì)胞的增殖。顯示的值為 4 個孔的平均值 ± SEM。
圖 8. 使用 Cell-by-Cell 分析對貼壁細(xì)胞進(jìn)行無標(biāo)記細(xì)胞計數(shù)。利用 Cell-by-Cell 和紅色對象計數(shù)對各種密度的 A549 NucRed 細(xì)胞進(jìn)行分析，以驗證無標(biāo)記計數(shù)隨時間的變化。(A) 圖像顯示了使用 Cell-by-Cell 軟件進(jìn)行的單個細(xì)胞遮蔽。(B) 不同密度下的時相計數(shù)和紅色計數(shù)的時程曲線，顯示數(shù)據(jù)疊加圖。(C) 48 h 內(nèi)計數(shù)數(shù)據(jù)的相關(guān)性表明 R2 值為 1，斜率為 1。這一結(jié)果在各種細(xì)胞類型中重復(fù)出現(xiàn)。顯示的值為 4 個孔的平均值 ± SEM。
訂購信息
訂購信息
產(chǎn)品 | 數(shù)量 | 產(chǎn)品目錄號 |
|---|---|---|
| Incucyte? 活細(xì)胞分析系統(tǒng) | 1 臺儀器 | 4647 |
| Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件模塊 | 1 個模塊 | 9600-0031 |
Incucyte? 高級無標(biāo)記分類分析軟件模塊 | 1 個模塊 | BA-04867 |
| Incucyte? 小鼠 IgG1 Fabfluor-488 抗體標(biāo)記染料 | 1 瓶 (50 μg) | 4745 |
| Incucyte? 小鼠 IgG2a Fabfluor-488 抗體標(biāo)記染料 | 1 瓶 (50 μg) | 4743 |
| Incucyte? 小鼠 IgG2b Fabfluor-488 抗體標(biāo)記染料 | 1 瓶 (50 μg) | 4744 |
| 用于細(xì)胞凋亡分析的 Incucyte? Annexin V 紅色染料 | 1 瓶 | 4641 |
| 用于細(xì)胞凋亡分析的 Incucyte? Annexin V 綠色染料 | 1 瓶 | 4642 |
| 用于細(xì)胞凋亡分析的 Incucyte? Caspase 3/7 綠色染料 | 20 μl | 4440 |
| 用于細(xì)胞凋亡分析的 Incucyte? Caspase 3/7 紅色染料 | 20 μl | 4704 |
| 用于死亡細(xì)胞計數(shù)的 Incucyte? Cytotox 紅色染料 | 5 μl x 5 | 4632 |
| 用于死亡細(xì)胞計數(shù)的 Incucyte? Cytotox 綠色染料 | 5 μl x 5 | 4633 |
| 用于死亡細(xì)胞計數(shù)的 Incucyte? Cytotox NIR 染料 | 100 μl | 4846 |
