用于活細(xì)胞分析的?Incucyte? EV 攝取分析
外泌體和細(xì)胞外囊泡 (EV) 均為小膜結(jié)合囊泡，通過在細(xì)胞之間傳輸脂質(zhì)、核酸和蛋白質(zhì)，在細(xì)胞間通訊中起到關(guān)鍵作用。不僅在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、疾病發(fā)展和治療用途遞送方面發(fā)揮出備受矚目的關(guān)鍵作用，并且已經(jīng)證實(shí)與癌癥、神經(jīng)退行性疾病和心血管疾病的基本分子機(jī)制相關(guān)。研究表明，EV 可以將蛋白質(zhì)、核酸和其他分子從親本細(xì)胞運(yùn)輸?shù)狡渌?xì)胞中，有望作為診療工具發(fā)揮強(qiáng)大實(shí)力（例如生物標(biāo)志物或工程化治療用途遞送產(chǎn)品）。
外泌體和 EV 已經(jīng)在諸多細(xì)胞生物學(xué)細(xì)分研究領(lǐng)域展現(xiàn)出不容小覷的生物學(xué)作用，因此迫切需要開發(fā)出可靠的分析方法，用于評估此類囊泡被活細(xì)胞的攝取情況。一直以來，傳統(tǒng)的 EV 標(biāo)記方法在追蹤細(xì)胞內(nèi)攝取情況方面都存在以下痛點(diǎn)：
- 方案繁瑣，導(dǎo)致 EV 的丟失和功能受損
- 終點(diǎn)分析測量局限于單個(gè)時(shí)間點(diǎn)
- 存在污染或細(xì)胞健康干擾風(fēng)險(xiǎn)，活細(xì)胞分析尚待優(yōu)化
- 無差別標(biāo)記細(xì)胞會(huì)降低 EV 攝取的動(dòng)力學(xué)測量可靠性
The Incucyte??Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可與 Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)配合使用，能夠?qū)崟r(shí)測量同一細(xì)胞群內(nèi)細(xì)胞內(nèi) EV 的攝取，從而監(jiān)測其生物功能。 ?研究人員可以借助該試劑盒獲得有關(guān) EV 攝取機(jī)制的寶貴見解，更好地推動(dòng)未來療法的發(fā)展。
EV 攝取分析解決方案
Incucyte? EV 攝取分析概述
Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒可對細(xì)胞 EV 攝取實(shí)現(xiàn)無擾動(dòng)、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)評估，并經(jīng)過驗(yàn)證可與配置有綠色/紅色或綠色/橙色/NIR 光學(xué)模塊的 Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)配合使用。Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記染料通過與蛋白質(zhì)和氨基酸共價(jià)結(jié)合，均勻地標(biāo)記小型 EV（例如外泌體）的質(zhì)膜。與 EV 不可逆結(jié)合并且可去除游離染料，雙管齊下地降低了攝取前或攝取期間染料非特異地附著到其他質(zhì)膜上的風(fēng)險(xiǎn)。
Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件模塊
The Incucyte? Cell-by-Cell 分析軟件模塊可支持一系列貼壁和非貼壁細(xì)胞的混合培養(yǎng)應(yīng)用。可以對貼壁和非貼壁細(xì)胞進(jìn)行非標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)，隨后可按照形狀、大小或熒光強(qiáng)度對細(xì)胞進(jìn)行逐個(gè)分類，定量分析混合培養(yǎng)中細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化，開啟全新的探索世界。
產(chǎn)品目錄號 9600-0031
利用 Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)進(jìn)行 EV 攝取分析
Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)是研究人員在外泌體和 EV 研究中的得力工具。具備實(shí)時(shí)圖像采集和分析功能，外加 EV 攝取分析功能，深入剖析細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。實(shí)現(xiàn) EV 攝取數(shù)據(jù)與細(xì)胞形態(tài)、功能和健康測量結(jié)果的結(jié)合，可通過單個(gè)孔洞悉不同處理或培養(yǎng)條件對于 EV 攝取的影響。Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)及其集成式軟件、Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒共同組成了一套全面的方法，對于研究活細(xì)胞中的外泌體和 EV 具有很好的幫助。
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Incucyte? EV 攝取分析的關(guān)鍵優(yōu)勢
在細(xì)胞群水平上，觀察并評價(jià)細(xì)胞內(nèi) EV 攝取變化或宿主細(xì)胞內(nèi)的形態(tài)變化
均勻標(biāo)記來自不同提取方法和不同源細(xì)胞的 EV
請參閱下面的示例數(shù)據(jù)
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易于遵循的分析設(shè)置，可保留 EV 并消除聚集和游離染料
支持 EV 的功能性攝取分析，可通過均勻標(biāo)記進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測量或下游分析
請參閱下面的示例數(shù)據(jù)
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Example Data for EV Uptake Assay
收集可靠的 EV 攝取動(dòng)力學(xué)測量數(shù)據(jù)
圖 1. 攝取細(xì)胞兼容性：使用 Incucyte? Exofluor 染料標(biāo)記 A549 外泌體（每孔 2 μg，HansaBioMed）。已標(biāo)記外泌體的攝取可以在各種細(xì)胞類型和培養(yǎng)基條件下實(shí)現(xiàn)可視化（上圖）。每種條件下的僅染料對照孔表明，熒光信號不是由于殘留的游離染料造成的（下圖）。使用已標(biāo)記的 A549 衍生外泌體處理各種細(xì)胞類型 24 小時(shí)后拍攝的圖像顯示，與對照相比，細(xì)胞形態(tài)沒有變化。
適用于各種來源的 EV
圖 2. EV 標(biāo)記兼容性：圖像顯示 Incucyte? Exofluor 綠色染料標(biāo)記的各種 EV 經(jīng) A549 受體細(xì)胞攝?。ㄌ幚砗?24 小時(shí)）。 ?A549 外泌體通過超濾和 SEC 方法提取 (HansaBioMed)，并在 2 μg/孔的條件下進(jìn)行處理。 ?人血漿來源外泌體（Abcam，超濾萃取法）的使用濃度為 4 μg/孔。 ?MSC 和 HEK293T EV（賽多利斯）均通過 TFF/IEX 色譜法提取，處理濃度分別為 1.5 x 108 和 8.3 x 107 顆粒/孔。
通過簡單的方案保留 EV 及其生物功能
圖 3. Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒分析設(shè)置的快速指南。試劑盒內(nèi)容物有用于去除游離染料的 Vivaspin? 色譜柱，用于在 Incucyte? 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)內(nèi)成像之前滅菌和去除聚集體的 Minisart? 過濾器。
評估 EV 攝取在化合物存在下的動(dòng)態(tài)變化
圖 4. EV 濃度依賴性：在通過離子交換色譜（賽多利斯）從 HEK293T 細(xì)胞中純化 EV 之后，使用 Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒標(biāo)記，并添加到 A549 攝取細(xì)胞中。在 2 天內(nèi)每 2 小時(shí)采集一次相位和綠色熒光圖像，并使用 Incucyte? Cell-by-Cell 軟件分析。(A) 將已標(biāo)記的 EV 滴定約 40 倍（4.2 x 108 至 1 x 107 顆粒/孔），并使用平均綠色熒光均值強(qiáng)度評估攝取情況。觀察到相應(yīng)的濃度依賴性熒光變化。 ?(B) Phase Object Count（相差成像物象計(jì)數(shù)）（標(biāo)準(zhǔn)化為 t=0）數(shù)據(jù)表明在所有測試的 EV 濃度下增殖沒有變化。
圖 5. EV 攝取由內(nèi)吞作用決定：將 A549 細(xì)胞接種過夜，然后在不含外泌體的培養(yǎng)基中用內(nèi)吞作用抑制劑 Dynasore（0.01 至 100 μM）處理。 ?Dynasore 處理后，立即添加用 Incucyte? Exofluor 綠色染料（2 μg/孔）標(biāo)記的 Hansa A549 外泌體。 ?外泌體攝取的濃度依賴性抑制 (IC50 = 2.72 μM) 反映在綠色熒光強(qiáng)度上（顯示 24 小時(shí)數(shù)據(jù)）。
EV 攝取分析技術(shù)資源
相關(guān)應(yīng)用
相關(guān)產(chǎn)品
| Product Details | Item Number | List Price | |
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| 加載中 | |||
EV 攝取的常見問答
經(jīng)過驗(yàn)證表明，Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒支持多種 EV 分離方法（包括沉淀、超濾、TFF/離子交換色譜和超速離心）。
每個(gè)濃縮管或過濾器最多可處理 40 μg 蛋白質(zhì)或 100 μL 標(biāo)記的外泌體樣品。蛋白質(zhì)負(fù)載量或樣品體積過高可能會(huì)導(dǎo)致過濾膜堵塞，標(biāo)記外泌體樣品超過 100 μL 將導(dǎo)致背景熒光增加。
我們建議使用 1-4 μg 蛋白質(zhì)/孔或 5 x 107 - 1 x 109 顆粒/孔范圍內(nèi)的外泌體。
Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒不包含 EV/外泌體，僅包含標(biāo)記染料、Vivaspin? 2 和 Minisart? 過濾器。所有 EV/外泌體和其他消耗品必須由客戶提供。
我們的分析試劑盒經(jīng)過優(yōu)化和專門設(shè)計(jì)，可與試劑盒中提供的 Vivaspin?2 濃縮管和/或 Minisart? 過濾器一起使用，與其他耗材混用可能導(dǎo)致信號強(qiáng)度偏差和干擾風(fēng)險(xiǎn)。如有濃縮管或過濾器需求，請向賽多利斯訂購（產(chǎn)品指南中提供的產(chǎn)品目錄號可能因包裝尺寸而異）。
Incucyte? EV 攝取分析應(yīng)在含有去外泌體血清 (-eFBS) 的分析培養(yǎng)基中進(jìn)行，以盡可能減少可能影響攝取動(dòng)力學(xué)的內(nèi)源性外泌體。
雖然 EV 分為三個(gè)子類，但本試劑盒僅針對外泌體顆粒進(jìn)行了驗(yàn)證。 ?我們尚未測試微囊泡或凋亡小體的標(biāo)記情況。
我們強(qiáng)烈建議使用 Cell-By-Cell 分析。然而，您也可以使用 Basic Analyzer，但可能需要更多優(yōu)化。請參閱產(chǎn)品指南了解更多詳情。
出于綠色熒光信號的原因，Incucyte? Exofluor 綠色 EV 標(biāo)記試劑盒適用于 Incucyte? SX5、S3 或 SX1 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)。
