腫瘤浸潤淋巴細胞：為什么要研究它們？
免疫療法是利用強大的宿主免疫系統(tǒng)靶向惡性細胞。在抗腫瘤治療中，機體必須有足夠的腫瘤浸潤淋巴細胞 (TIL) 滲透腫瘤且在其中存活和增殖，通過殺死微環(huán)境中的癌細胞，實現(xiàn)對療法的最佳病理反應。通過對 T 細胞向實體瘤浸潤的這一過程進行體外建模，可以鑒定提高細胞毒性 TIL 效率的方法，從而提高免疫療法效力并改善患者預后。
使用高通量流式細胞儀對腫瘤浸潤淋巴細胞 (TIL) 進行全面體外分析
- 在高級細胞模型中對 TIL 和非浸潤性淋巴細胞進行體外定量分析和表型分析的完整解決方案。
- 精簡的工作流程；從始至終使用 96 孔板。
- 最大程度地減少了可變性，增強結果可信度；增加重復測定次數(shù)，并且無需延長采集時間。
關鍵優(yōu)勢
以溫和方式分離 3D 腫瘤模型 ，?從而對 T 細胞浸潤進行定量分析 - 3D 細胞模型分離方案易于遵守，因而可以輕松定量分析腫瘤浸潤淋巴細胞。
在生理相關的高級細胞模型中鑒定免疫細胞表型-?對浸潤和非浸潤細胞進行免疫表型分析，以評估活化特征和細胞亞群。
使用集成式 iQue Forecyt? 軟件實時采集和分析數(shù)據(jù) -??集采集和分析功能于一體的軟件解決方案，可以更快地生成可執(zhí)行結果。
提高分析效率?- 快速采樣，可以對高度可變的生物學特征進行更多次重復測定。
以溫和方式分離 3D 腫瘤模型，從而對 T 細胞浸潤進行定量分析。
圖 1.?使用 iQue? 高通量流式細胞儀平臺對腫瘤浸潤淋巴細胞進行體外分析的方案示意圖。
在生理相關的高級細胞模型中鑒定免疫細胞表型。
- 定量分析免疫細胞浸潤對刺激的反應。
- 了解浸潤細胞和非浸潤細胞活化特征的表型差異，確定腫瘤微環(huán)境的影響。
圖 2.(A) 浸潤到乳腺癌腫瘤球中的 CD3+ PBMC 呈濃度依賴性增加。
BT474（4,000 個細胞/孔）腫瘤球形成 72 小時后，再添加 PBMC（20,000 個細胞/孔）和 CD3/CD28 Dynabead。使用 CD3/CD28 Dynabead 激活 PBMC 會導致 CD3 T 細胞以濃度依賴性方式浸潤到乳腺癌腫瘤球中。微球密度最高 (20K) 時，PBMC 開始殺死腫瘤球，隨著腫瘤球受到攻擊，浸潤減少。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM，n = 8。
與非浸潤細胞相比，(B) 和 (C) 浸潤細胞的活化標志物表達水平更高。 使用 T 細胞活化和細胞因子分析試劑盒 (TCA)??收集和標記非浸潤細胞。然后，分離腫瘤球并標記浸潤細胞。浸潤細胞表達更高水平的 CD69（早期）、CD25（中期）和 HLA-DR（晚期）活化標志物。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM，重復測定 8 次。
圖 3.T 細胞的腫瘤球浸潤具有細胞類型特異性，并受基質細胞調節(jié)。
(A)?A549、SKOV-3 或 BT474（5,000 個細胞/孔）腫瘤球形成 72 小時后，再添加預活化的 (CD3/CD28 Dynabeads?) PBMC（25,000 個細胞/孔）。所示數(shù)據(jù)代表每種癌癥有 3 個供體。CD3 浸潤取決于癌癥類型。(B) CD8:CD4 比值也因癌癥類型不同而有所差異，它是反映治療結果和病理完全反應 (pCR) 可能性的指標。 (C) 將 BT474 單獨或按 1:1 比例將其與 CCD1068SK 成纖維細胞混合形成腫瘤球 72 小時后，再接種預活化的 PBMC。納入成纖維細胞使 CD3+ 細胞的腫瘤球浸潤顯著減少 (>60%)。
使用集成式 iQue Forecyt? 軟件實時采集和分析數(shù)據(jù)。
可以同時從多個板采集數(shù)據(jù)并分析，從而更快地獲得結果。
圖 4.集成式 iQue Forecyt? 軟件可快速分析數(shù)據(jù)，縮短數(shù)據(jù)處理時間。
TCA 試劑盒具有一個預定義設門模板，可通過輕松設置實現(xiàn)自動化處理?？梢酝ㄟ^定義陽性（綠色）和陰性（紅色）細胞群來調整設門，從而自動更新孔板視圖讀數(shù)。然后，可以按照簡單易用的向導將孔板視圖轉換成濃度響應曲線。
提高分析效率。
得益于快速采樣，重復測定次數(shù)得以增加，因此可以減輕高度可變的生物學特征所存在的分析挑戰(zhàn)。
圖 5.在分離腫瘤球后，使用 iQue? 高通量流式細胞儀平臺對 CD3 細胞浸潤進行定量分析，評估重復測定次數(shù)的影響。
借助 iQue? 的高通量性能，用戶可以在不延長采集時間的同時增加重復測定次數(shù)，從而加快可變生物學效應的研究。
96 孔板：
- 4 次重復測定（每 4 次清洗一次，每 4 次搖晃一次，吸取時間 5 秒）21 分鐘 32 秒
- 8 次重復測定（每 8 次清洗一次，每 4 次搖晃一次，吸取時間 5 秒）19 分鐘 8 秒
驗證
圖 6：根據(jù) Incucyte? 圖像驗證清洗是否成功以及有無浸潤跡象。
(A) 按照方案清洗腫瘤球，并在每次清洗后對其進行成像分析，鑒定剩余的 PBMC（使用 Cytolight 快速綠色染料標記）。 (B) Incucyte? 的綠色積分強度 (GCU x μm2) 指標可定量反映浸潤性，強調了 PBMC 進入腫瘤的活化依賴性。
訂購信息
| iQue? 人 T 細胞活化分析試劑盒 | ||
|---|---|---|
| 平臺：兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus - VBR 配置 | ||
| 現(xiàn)有規(guī)格 | 產品目錄號 | |
1 x 96 孔 | 90560 | |
5 x 96 孔 | 90561 | |
1 x 384 孔 | 90562 | |
5 x 384 孔 | 90563 | |
| Incucyte? 試劑 | ||
|---|---|---|
| 平臺：兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus - VBR 配置 | ||
| 適用于活細胞細胞質標記的 Incucyte? Cytolight 快速染料 | 產品目錄號 | |
| 1 瓶（可標記 1,000 萬-1 億個細胞） | ||
