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采用活細胞分析和流式細胞儀聯(lián)合分析免疫細胞殺傷

Incucyte? - iQue? 工作流程

為了更好地模擬體內(nèi)研究,體外細胞生物學(xué)模型變得越來越復(fù)雜。然而,從復(fù)雜生物相互作用中獲得的結(jié)果也越來越難以解讀,對此,還需要進行更深入的了解。用戶需要通過綜合性專業(yè)技術(shù)來進行更詳細的分析,從而更深入地研究生物學(xué)特征并得出更具生理相關(guān)性的結(jié)論。為此,必須開發(fā)可更輕松地關(guān)聯(lián)技術(shù)平臺并且有效利用時間和樣品的工作流程。


詢價

下載應(yīng)用指南


應(yīng)用

Incucyte? - iQue? 工作流程

Incucyte - iQue 工作流程通過免疫細胞殺傷應(yīng)用描述如何使用單個檢測板獲取實時相互作用、每日細胞因子濃度和 T 細胞活化特征信息。

  • 將表達?Incucyte? Nuclight 綠色慢病毒(EF1a、Bleo) 的貼壁或非貼壁靶細胞與免疫細胞(無標記)進行共培養(yǎng)。
  • 使用 Incucyte? 監(jiān)測腫瘤細胞增殖和死亡。根據(jù) NucGreen 熒光靶細胞計數(shù)和培養(yǎng)物中的 Annexin V 添加量進行監(jiān)測。
  • 通過從檢測板采樣并使用 Qbeads (捕獲微球和檢測抗體),可以在整個實驗過程中監(jiān)測每日細胞因子濃度。
  • Incucyte? 自動圖像分析可實現(xiàn)有選擇性地對腫瘤細胞死亡 (Basic Analyzer) 以及 PBMC 增殖和形狀變化 (Cell-by-Cell) 進行定量分析。
  • 將細胞分離后(按照 Incucyte? - iQue? 工作流程方案),使用?iQue? 人 T 細胞活化分析試劑盒進行標記?。
  • 然后,根據(jù)預(yù)定義的設(shè)門策略定量分析 T 細胞亞群和活化特征。

關(guān)鍵優(yōu)勢

執(zhí)行細胞因子動力學(xué)測定時,可以在無干擾情況下采集少量上清液樣品,最大程度地提高樣品使用率并減少操作

可以對整個腫瘤細胞殺傷過程(> 5 天)進行監(jiān)測,并可在無干擾情況下采集上清液樣品,用于測定細胞因子濃度。


圖 1.可以通過結(jié)合使用多種技術(shù)了解事件發(fā)生的先后順序。

在共培養(yǎng)免疫細胞殺傷分析中觀察到 CD3/CD28 Dynabead 活化的影響。將 SKOV-3 細胞以 4,000 個細胞/孔的密度接種,等待 4 小時,使其貼壁。然后,將系列稀釋的 Dynabead 添加到孔中,然后再以 10,000 個細胞/孔的密度添加 PBMC。每天采集上清液樣品 (10 μL),用于細胞因子分析。

時間數(shù)據(jù)顯示了事件發(fā)生的時間表,從中可以發(fā)現(xiàn),首先觀察到細胞因子分泌增加(A、B),然后效應(yīng)細胞增殖增加 (C),這導(dǎo)致靶細胞數(shù)量減少 (D)。這是在 120 小時內(nèi)收集的數(shù)據(jù)。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM,n = 3。

易于使用的即混即讀式檢測試劑盒,采用 iQue? - Incucyte? 兼容試劑

  • 可以從單個檢測板中收集數(shù)據(jù)并將數(shù)據(jù)進行匯總,通過共培養(yǎng)模型更深入地了解生物學(xué)
  • 該工作流程既適用于貼壁靶細胞,也適用于非貼壁靶細胞


圖 2.易于遵循的工作流程,結(jié)合使用 Incucyte? 和 iQue? 進行免疫細胞殺傷分析。

將亞群分析與空間和形態(tài)定量分析相結(jié)合

  • 自動進行 T 細胞亞群的表型分析和分泌細胞因子的定量分析
  • 實時觀察和定量分析靶細胞群和效應(yīng)細胞群的表型變化


圖 3a. 各平臺之間的靶細胞分析具有可比性。

(A) 相差/熒光圖像顯示了 SKOV-3 Nuclight 綠色試劑轉(zhuǎn)染的卵巢癌細胞(靶細胞)與未標記的 PBMC(效應(yīng)細胞)的共培養(yǎng)物。

(B) Incucyte? 軟件可以直接基于圖像檢測及定量分析靶細胞(有粉色外沿的綠色對象),從而確定靶細胞數(shù)量。

(C) ?2D 密度圖 iQue? 分析結(jié)果表明了如何從陰性 PBMC 細胞群中分離出具有綠色標記的靶細胞。

(D) 靶細胞頻率。

圖 3b.根據(jù)預(yù)定義的設(shè)門策略自動分析 T 細胞亞群。

TCA 試劑盒方便用戶使用,可以鑒定和定量分析 T 細胞活化標志物,并且最大程度地減少了用戶干預(yù)。

可提供更多生物學(xué)信息,使您更深入地了解生理學(xué)

通過結(jié)合使用多種技術(shù),可以更深入地了解生物學(xué)。


圖 4.僅通過一次檢測即可定量分析抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒性、細胞相互作用的變化和 T 細胞活化。

在非貼壁靶細胞和 PBMC 的共培養(yǎng)中觀察到抗 hCD3xCD19 BiTE 抗體活化的影響。以 15,000 個細胞/孔的密度接種 Ramos 細胞(綠色)。先將 BiTE 抗體添加到孔中,然后再添加 PBMC(75,000 個細胞/孔)。

(A)?熒光強度測定結(jié)果的減弱表明,BiTE 抗體誘導(dǎo)殺傷 Ramos 細胞,且呈濃度依賴性。

(B) 細胞聚集也增加并呈濃度依賴性,這是免疫細胞殺傷的標志。將 BiTE 刺激與 Dynabead 刺激進行比較時,觀察到 T 細胞活化標志物有所差異

(C, D)?在圖像中觀察到形態(tài)變化

(E, F) 可執(zhí)行定性鑒定。這是在 72 小時內(nèi)收集的數(shù)據(jù)。每個數(shù)據(jù)點代表平均值 ± SEM,n = 3。

訂購信息


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IFNγ 選項 1

QBeads Assay Builder


TNFα 選項 2
iQue? 人 T 細胞活化分析試劑盒
平臺:兼容 iQue? 3/iQue? Screener Plus - VBR 配置
現(xiàn)有規(guī)格產(chǎn)品目錄號

1 x 96 孔

90560

5 x 96 孔

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1 x 384 孔

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5 x 384 孔

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Incucyte? Nuclight 綠色慢病毒試劑
現(xiàn)有規(guī)格產(chǎn)品目錄號

0.2mL; 1x106 TU/mL

4475 或 4626


資源

文獻和文檔

方案

Incucyte? – iQue3 免疫細胞殺傷檢測工作流程

產(chǎn)品指南

T 細胞活化和細胞因子分析試劑盒

方案

T 細胞配套試劑盒

方案

貼壁細胞分離

海報

T 細胞活化:利用免疫表型和分泌的細胞因子的多重分析進行 T 細胞活化的常規(guī)監(jiān)測

信息圖

增強免疫細胞表征

應(yīng)用指南

采用活細胞分析和流式細胞儀聯(lián)合分析免疫細胞殺傷

應(yīng)用指南

使用多重 T 細胞活化分析進行激酶抑制劑表型篩選

應(yīng)用指南

細胞殺傷

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