T 細(xì)胞活化
抗原和共刺激信號(hào)對(duì)初始 T 細(xì)胞的活化啟動(dòng)了 CD4+ 輔助 T 細(xì)胞和 CD8+ 細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞的克隆擴(kuò)增。除 T 細(xì)胞增殖外，多個(gè)信號(hào)通路被激活，引起功能性細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)和細(xì)胞因子的釋放。
研究免疫系統(tǒng)靶向癌癥治療（雙特異性抗體、檢查點(diǎn)抑制劑抗體及 CAR-T 細(xì)胞）的市場(chǎng)正在不斷增長(zhǎng)。T 細(xì)胞活化分析的監(jiān)測(cè)和定量能夠幫助我們更好地理解 T 細(xì)胞如何對(duì)某些刺激作出響應(yīng)，從而深入洞察藥物如何利用免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大作用。
檢測(cè)原理
在單個(gè)孔中，通過(guò)多重方法評(píng)估 T 細(xì)胞活化、增殖和細(xì)胞因子釋放。
圖 1.人 T 細(xì)胞活化分析試劑盒的分析原理示意圖。不同 T 細(xì)胞表型分析主要通過(guò)檢測(cè) 3 個(gè)活化標(biāo)志物的表達(dá)：CD69（早期）、CD25（晚期）和 HLA-DR（更晚期）。還可以使用 2-plex Qbeads，通過(guò)夾心法免疫分析，在同一孔中定量分析 2 種效應(yīng)細(xì)胞因子（IFNγ 和 TNFα）。您可以同時(shí)測(cè)定 T 細(xì)胞增殖或編碼的靶細(xì)胞，但本示意圖中未包含此分析。
關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)
在生理相關(guān)的模型中洞察 T 細(xì)胞活化狀態(tài)的更多生物學(xué)信息
圖 2. 激酶抑制劑篩選突出顯示了人 T 細(xì)胞活化分析中的差異。
使用一組激酶抑制劑 (20 μM) 處理 PBMCs 1 小時(shí)。然后加入 CD3/CD28 Dynabead 刺激活化 24 小時(shí)。使用 T 細(xì)胞活化和細(xì)胞因子分析試劑盒聯(lián)合 iQue? 系統(tǒng)分析 10 μL 樣本。
(A) CD4+CD69+ 設(shè)門策略孔板視圖。綠色框代表僅含培養(yǎng)基的對(duì)照孔。紅色框代表環(huán)孢菌素對(duì)照孔。黃色框代表圖 B-D 中展示的化合物（1：魯索替尼；2：雙吲哚基順丁烯二酰亞胺 I；3：AZD 7762）。
(B, C) CD4+ 和 CD8+ 細(xì)胞上 CD69、CD25 和 HLA-DR 的表達(dá)。
(D) PBMCs 釋放的 IFNγ 和 TNFα 細(xì)胞因子。
同時(shí)進(jìn)行表面蛋白和細(xì)胞因子表達(dá)的定量測(cè)定
圖 3.對(duì)來(lái)自不同供體的 PBMC 的活化特征和細(xì)胞因子釋放的差異進(jìn)行定量分析。
將 SKOV-3 細(xì)胞（4 K/孔）與來(lái)自 3 個(gè)供體的 PBMCs（10 K/孔）進(jìn)行共培養(yǎng)分析。使用 CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)活化。4 天后根據(jù)貼壁細(xì)胞分離方案分離細(xì)胞，并用 T 細(xì)胞活化和細(xì)胞因子分析試劑盒進(jìn)行分析。(A-C) 早期 (CD69)、晚期 (CD25) 和更晚期 (HLA-DR) T 細(xì)胞活化標(biāo)志物的表達(dá)。(D) 各個(gè)供體的 IFNγ 釋放數(shù)據(jù)。
易于使用和解析；可使用預(yù)先設(shè)門策略
圖 4.利用 iQue? ForeCyt? 上的預(yù)先設(shè)門功能進(jìn)行人 T 細(xì)胞亞群的自動(dòng)表型分析
最大程度減少樣本操作：小體積，單次清洗，無(wú)需稀釋
- 簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方案，將細(xì)胞和上清液作為一個(gè)樣本，從而簡(jiǎn)化了工作流程。
- 無(wú)需標(biāo)記或進(jìn)行額外的優(yōu)化步驟。
圖 5a. 使用清晰易懂的方案，通過(guò) T 細(xì)胞活化分析試劑盒進(jìn)行 T 細(xì)胞表型和細(xì)胞因子釋放分析。
圖 5b. 清晰易懂的改進(jìn)方案，分析中允許包含靶細(xì)胞。可通過(guò) T 細(xì)胞活化分析試劑盒進(jìn)行 T 細(xì)胞表型和細(xì)胞因子釋放分析。
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