用于病毒載體基因傳遞的實驗室工具
病毒載體基因傳遞是將外源遺傳物質(zhì)插入靶細胞的常用方法之一。在嵌合抗原受體 (CAR) T 細胞治療中，慢病毒載體是首選方法，因為它們具有高效、穩(wěn)定和多功能性的優(yōu)點。
然而，這一過程中還存在一些尚待解決的挑戰(zhàn)，例如轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的優(yōu)化、載體關(guān)鍵質(zhì)量屬性的純化和表征。
為此，賽多利斯提出通過正交技術(shù)來簡化慢病毒載體的研發(fā)和實驗室規(guī)模生產(chǎn)：
- 通過創(chuàng)新、快速的基于圖像的檢測方法來確定感染滴度
- 快速、一步式完成慢病毒載體的收獲和澄清
- 開發(fā)用于慢病毒生產(chǎn)的包裝細胞系
Incucyte? 活細胞分析平臺
這是一個連續(xù)、實時的活細胞成像和分析平臺，研究人員無需從孵育箱培養(yǎng)箱中取出細胞或干擾培養(yǎng)物即可進行分析。
- 可以分析細胞特異性和隨時間變化的生物學活性
- 可以通過細胞圖像和視頻進行結(jié)果的可視化和驗證
- 系統(tǒng)可自動采集和分析細胞圖像，為無人值守提供便利
精選應(yīng)用：快速準確測定慢病毒感染滴度
病毒載體樣品的功能性感染滴度測定非常重要，載體質(zhì)量控制是病毒載體工藝開發(fā)和生產(chǎn)的重要瓶頸。
我們開發(fā)了一種創(chuàng)新的、基于實時成像的方法，那就是使用 Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)來量化抗 CD19 CAR 慢病毒載體的感染滴度。
相關(guān)應(yīng)用指南：慢病毒滴度測定的實施活細胞分析
Sartoclear ? Dynamics Lab
適用于收獲具有高細胞密度的哺乳動物細胞培養(yǎng)物的一步式方法。濾膜采用硅藻土 (DE)，可以有效解決以下的 CAR-T 工作流程挑戰(zhàn)：
- 快速過濾
- 安全操作
- 保留病毒活性
精選應(yīng)用：實驗室規(guī)模收獲和澄清慢病毒載體
高效收獲慢病毒可以消除主要污染物并降低溶液的濁度，同時保持 CAR-T 工作流程中至關(guān)重要的載體活性。該方法大幅提高了慢病毒顆?；厥章屎透腥镜味?。
科學家們可以通過瞬時轉(zhuǎn)染 HEK293T/17 SF 懸浮細胞產(chǎn)生慢病毒載體，并使用 Sartolab? RF50 和 Sartoclear Dynamics? Lab V50 完成澄清操作。
相關(guān)應(yīng)用指南：使用 Sartoclear 完成實驗室規(guī)模的慢病毒載體收獲和澄清
用于病毒純化和質(zhì)粒 DNA 分離的試劑盒和 IEX 裝置
Vivapure? Lentiselect 和 Adenopack?
慢病毒和腺病毒純化試劑盒采用了膜層析法，可以從 20 至 1,000 mL 細胞培養(yǎng)物中快速安全地純化病毒。 ?憑借其高產(chǎn)量和低內(nèi)毒素水平，已成為細胞檢測等下游應(yīng)用的理想選擇。
- 即用型試劑盒，包含純化所需的緩沖液和耗材
- 只需幾個小時即可純化和濃縮病毒載體
- 無需耗時的超速離心
Sartobind? Lab 或 Vivapure? D Units
用于從宿主細胞蛋白、RNA 和染色體 DNA 中分離和純化質(zhì)粒。
該膜層析裝置上的離子交換能夠快速分離質(zhì)粒 DNA，達到足夠的純度，用于限制性酶內(nèi)切和測序
CellCelector 自動細胞篩選和分離平臺
一套全自動細胞成像和分離系統(tǒng)，用于檢測、篩選和分離單細胞、細胞集群、腫瘤球、類器官、單細胞克隆團和貼壁集落。
集成了單克隆性證明的單輪單細胞克隆和細胞系開發(fā)，可用于慢病毒包裝和細胞系生產(chǎn)。
CellCelector 具有專為從半液體培養(yǎng)基（例如甲基纖維素）和固體培養(yǎng)基（例如瓊脂）中挑取細胞集落而開發(fā)的半固體培養(yǎng)基挑取模塊，是自動篩選和分離細菌菌落的理想解決方案。
相關(guān)出版物：
Broussau, S., Lytvyn V., Simoneau M. et al:?
Packaging cells for lentiviral vectors generated using the cumate and coumermycin gene induction systems and nanowell single-cell cloning. Molecular Therapy: Methods & Clinical Development Vol. 29 June 2023 57
CAR-載體制備和測試的優(yōu)勢
Sartoclear Dynamics? Lab V50 和 Sartolab? RF50 過濾裝置可一步澄清用于生產(chǎn)慢病毒的 HEK293T 培養(yǎng)物，省去離心步驟從而縮短處理時間。該方法在慢病毒顆?；厥章史矫嬉踩〉昧?87% 的優(yōu)異結(jié)果。
Incucyte? 活細胞分析系統(tǒng)提供快速、非侵入性且簡便的方法，可以對抗 CD19 CAR 慢病毒載體的感染滴度進行高通量功能定量。實時動態(tài)讀數(shù)和集成軟件能夠追蹤轉(zhuǎn)導(dǎo)細胞存活情況隨時間的變化，并確定最佳讀數(shù)時間點。
Sartoclear Dynamics? Lab 的哺乳動物細胞培養(yǎng)物澄清功能和 Vivapure? 的質(zhì)粒 DNA 膜層析功能 - 以及慢病毒純化和濃縮試劑盒 - 為研究人員提供快速、安全且易于使用的解決方案。根據(jù)您的樣品量選擇最方便的試劑盒！
CAR-載體制備和測試資源
常見問題解答
Incucyte? Titer Assay 的實用性已通過一項穩(wěn)定性研究得到闡述，該研究測試了一系列物理條件對病毒感染性的影響。LV 滴度在四個凍融循環(huán)后保持不變，我們可以在 DSP 步驟之間將 LV 存儲在 -80 ℃ 下，以供將來的分析測試。研究可能影響感染滴度的過程參數(shù)對于維持病毒載體的感染潛力至關(guān)重要。
Sartoclear Dynamics? Lab V50 不需要離心步驟，可以減少處理時間，有利于快速處理。此外，Sartolab? RF50 具有出色的過濾裝置設(shè)計，可通過較大的過濾面積盡可能降低病毒材料溢出的風險，讓操作更安全。研究人員可以將其與 MultiStation 并行使用，從而實現(xiàn)高達 87% 的慢病毒顆粒回收率。
慢病毒純化和濃縮試劑盒為需要回收純化重組慢病毒顆粒以進行體外轉(zhuǎn)染的研究人員提供了快速、安全且易于使用的解決方案，支持樣品量高達 4 – 5 × 109/mL。
賽多利斯提供三種試劑盒規(guī)格用于純化和濃縮 VSV-G 假型慢病毒，分別對應(yīng) 40 mL、500 mL 或高達 1 L 的細胞培養(yǎng)物，可收獲 8 × 108 至 1 × 1010 的高滴度感染顆粒。
在開發(fā)細菌細胞系的過程中，生產(chǎn)工藝的自動化對于提高通量和優(yōu)化產(chǎn)量非常有益。CellCelector 具有專為從半液體固體培養(yǎng)基（例如甲基纖維素）和固體培養(yǎng)基（例如瓊脂）中挑取細胞集落而開發(fā)的半固體培養(yǎng)基挑取模塊，能夠自動選擇篩選和分離陽性細菌菌落，用于評估和進一步的下游處理。
