應(yīng)用指南：如何移取 PCR 預(yù)混液從而提高 qPCR 結(jié)果的準(zhǔn)確度
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 檢測(cè)的靈敏度高，這一點(diǎn)是在科學(xué)實(shí)驗(yàn)室 — 特別是在從事臨床診斷和生物制藥的實(shí)驗(yàn)室中得以成功廣泛應(yīng)用的重要原因之一。然而，移液技術(shù)等因素會(huì)影響 PCR 檢測(cè)結(jié)果。
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常見(jiàn)問(wèn)題解答
- 移液操作對(duì) qPCR 結(jié)果有什么影響？ ?- PCR 預(yù)混液中含有蛋白質(zhì)，不當(dāng)?shù)囊埔翰僮骺赡軙?huì)在樣品中產(chǎn)生氣泡，這可能會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離預(yù)期。
- 在使用 PCR 預(yù)混液時(shí)，哪種移液技術(shù)最適用？- 根據(jù) ISO 指南，建議將移液器吸頭預(yù)先潤(rùn)濕 3 到 5 次，同時(shí)建議使用反向移液技術(shù)，因?yàn)?PCR 預(yù)混液具有粘性。
- 在使用 PCR 預(yù)混液時(shí)，移液器的校準(zhǔn)重要嗎？- 處理 PCR 預(yù)混液等粘性材料時(shí)無(wú)法避免出現(xiàn)誤差。因此，盡可能多地消除風(fēng)險(xiǎn)因素很重要。確保移液器定期維護(hù)和校準(zhǔn)是保持結(jié)果準(zhǔn)確和重現(xiàn)性的有效方法。
- 在準(zhǔn)備 qPCR 檢測(cè)時(shí)，我應(yīng)該使用多道移液器嗎？- 在 qPCR 檢測(cè)中使用多道移液器可以確保均勻并快速地將等量 PCR 預(yù)混液分配到多個(gè)孔中。這在使用 96 孔板或 384 孔板時(shí)尤其節(jié)省時(shí)間。使用電動(dòng)移液器和多次分液模式可以進(jìn)一步提高實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。
PCR 預(yù)混液通常在 qPCR 準(zhǔn)備過(guò)程中使用，但準(zhǔn)確移液可能存在一定的難度。有關(guān) PCR 預(yù)混液良好移液操作的詳細(xì)信息，請(qǐng)下載此應(yīng)用指南，并了解以下內(nèi)容：
- 移取粘性液體的指南
- 使用電動(dòng)移液器的優(yōu)勢(shì)
- 應(yīng)用正向和反向移液技術(shù)獲取理想結(jié)果
- 適用于 qPCR 準(zhǔn)備的合適移液器吸頭
