使用 CellCelector 自動分離單個精子細胞
單個精子細胞分離對于通過遺傳指紋分析來鑒定家庭關(guān)系問題、在法醫(yī)學中揭露性犯罪以及完成體外受精過程都至關(guān)重要。
我們將在此處簡單介紹如何使用 CellCelector 全自動無損細胞分離系統(tǒng)分離單個精子細胞。
CellCelector將高精度機械挑取手臂與高內(nèi)涵倒置顯微鏡獨特結(jié)合，可以實現(xiàn)自動化細胞分析，并利用玻璃毛細管分離單個精子細胞。您可以通過 CellCelector 系統(tǒng)將耗時的手動操作轉(zhuǎn)換為標準的自動化程序。
使用 20x 物鏡在明場下觀察并分離單個精子細胞。
使用一些用于在顯微鏡下測量細胞特性的軟件功能，在約 5 x 33 μm 處測定精子細胞的大小。
為便于查看，在矩形標記區(qū)域中顯示了放大的圖片（右下角）。
單個精子細胞的檢測
單個精子細胞的檢測可以在手動模式下通過鼠標點擊實時圖像屏幕來完成，也可以在樣本掃描后使用一組經(jīng)過調(diào)整的檢測參數(shù)（直徑、面積、延伸率等）自動進行檢測。
通過定義一系列灰度值可以完成基本檢測。目標細胞可以從鄰近細胞和背景中分離出來。根據(jù)灰度值閾值的設(shè)置方式，可以檢測完整單個精子或僅檢測精子細胞的頭部。
建立自動檢測單個人類精子細胞的參數(shù)。
通過調(diào)整灰度值的范圍（A 和 B），可以根據(jù)參考圖像 (C) 檢測精子的不同部分，檢測區(qū)域用綠色標記（D 和 E）。綜合考慮直徑、面積、延伸率 (F) 等附加參數(shù)，可以更好地改善掃描結(jié)果（G 和 H）。
單個精子細胞的分離
使用內(nèi)徑為 30 μm 的單細胞挑取用玻璃毛細管分離單個精子細胞。通過使用體積為60 nL的液體在細胞正上方形成抽吸壓力，使細胞脫離底部，并將其與液體一起吸入玻璃毛細管中。將分離得到的精子細胞轉(zhuǎn)移至 2 x 9 孔 Ibidi 載玻片上各個獨立的孔中。自動記錄每個單細胞分離的挑取前后的圖像，并將這些圖像保存在數(shù)據(jù)庫中。
在分離單個精子細胞之前（左）和之后（右）拍攝的顯微圖像。