使用 CRISPR/Cas 進行基因編輯:CellCelector 可作為靶向細胞分離和單細胞克隆的理想工具
CRISPR-Cas9 基因組編輯是一種對細胞進行基因修飾的方法。該方法需要使用 Cas9 核酸酶(一種非特異性切割 DNA 的酶)和合成引導(dǎo) RNA 來轉(zhuǎn)染細胞,其中后者負責引導(dǎo) Cas9 核酸酶到 DNA 剪切位點。由此產(chǎn)生的雙鏈斷裂將激活細胞內(nèi)在修復(fù)系統(tǒng)。通過添加修復(fù)模板,同源定向修復(fù) (HDR) 可以在修復(fù)過程中插入序列,導(dǎo)致基因敲入突變。在沒有修復(fù)模板的情況下,細胞通過非同源末端連接 (NHEJ) 實現(xiàn)修復(fù)。但 NHEJ 經(jīng)常引入小片段的缺失或插入,使修復(fù)基因序列中斷,從而導(dǎo)致基因敲除突變。
然而,CRISPR-Cas9 編輯在不同細胞上可能會得到不同結(jié)果,最終生成異質(zhì)性細胞群。許多實驗都要求細胞具有相同的遺傳背景。這可以通過單細胞克隆使其攜帶期望基因來實現(xiàn)。
CellCelector 是該應(yīng)用的有力工具。賽多利斯與 Probiogen AG 合作開發(fā)了一套新的?單細胞克隆方法— HT-NIC 法,此方法在多個方面都勝過了常用的克隆方法,如有限稀釋克隆法。有限稀釋克隆法需要稀釋單細胞使細胞彼此完全分離以達到單克隆性。然而,由于缺乏細胞間通訊,許多細胞可能不耐受單細胞稀釋并因此導(dǎo)致細胞大量丟失。我們的新方法可以正確解決這一問題。除此之外,HT-NIC 法還具有大幅節(jié)省成本和時間,集成了單克隆性和活力證明功能等優(yōu)勢。了解更多應(yīng)用于基因編輯技術(shù)的產(chǎn)品,請聯(lián)系我們!