T 細胞耗竭
T 細胞耗竭是一個概念寬泛的術(shù)語，用于描述長期刺激造成的 T 細胞功能障礙。耗竭性t細胞可表現(xiàn)出獨特的表型，包括抑制性標(biāo)志物（例如 PD-1、LAG-3 和 TIM-3）過度表達，以及 T 細胞釋放促炎性細胞因子（IFNγ 和 TNFα）的能力減弱。t細胞耗竭通常發(fā)生在腫瘤微環(huán)境中，耗竭 t 細胞將喪失細胞毒性作用，無法殺傷癌細胞。
如何逆轉(zhuǎn)或克服 T 細胞的耗竭狀態(tài)問題一直備受關(guān)注，特別是通過加入檢查點抑制抗體來產(chǎn)生 CAR-T 細胞這一研究。因此，模擬 t細胞耗竭從問題到解決方案的環(huán)境能夠幫助我們進一步了解這一現(xiàn)象。
檢測原理
在單個孔中，通過多重方法評估 T 細胞耗竭、增殖和細胞因子釋放。
圖 1. iQue? 人 T 細胞耗竭分析試劑盒的分析原理示意圖。T 細胞表型分析主要通過檢測 3 個耗竭標(biāo)志物的表達：PD-1（早期）、LAG-3（中期）和 TIM-3（晚期）。還可以使用 2-plex Qbeads，通過夾心法免疫分析，在同一孔中定量分析 2 種效應(yīng)細胞因子（IFNg 和 TNFα）。您也可以選擇同時測定 T 細胞增殖或編碼的靶細胞（本示意圖中未包含此分析）。
關(guān)鍵優(yōu)勢
同時進行表面蛋白和細胞因子表達的定量測定
圖 2.耗竭的 T 細胞將過表達抑制性受體，并產(chǎn)生低濃度的效應(yīng)細胞因子 TNFα
將未耗竭（即先前未刺激）或耗竭前的 CD3+ T 細胞以 200 K/孔的密度接種。耗竭的 T 細胞在接種前用 Dynabead CD3/CD28（微球:細胞比例 1:1）刺激，然后每隔 2-3 天再次刺激（總共刺激 5 次）。在孔中使用不同密度的 Dynabead CD3/CD28 誘導(dǎo)活化。對照孔中不使用 Dynabead。在 24 h 時，在 iQue? 3 上使用 iQue? 人 T 細胞耗竭分析試劑盒分析 10 μL 樣本。
在生理相關(guān)的模型中洞察 T 細胞活化狀態(tài)的更多生物學(xué)信息
圖 3. LAG-3 過表達在耗竭 T 細胞上持續(xù) 3 天以上
將未耗竭（即先前未刺激）或耗竭前的 CD3+ T 細胞以 200 K/孔的密度接種。耗竭的 T 細胞用 Dynabead CD3/CD28（微球:細胞比例 1:1）進行反復(fù)刺激（每隔 2-3 天次刺激一次，總共刺激 5 次）。在孔中使用 Dynabead CD3/CD28 誘導(dǎo)活化。每 24 h 使用 iQue? 人 T 細胞耗竭分析試劑盒分析 10 μL 樣本。
易于使用和解析；可使用預(yù)先設(shè)門策略
圖 4.采用 iQue? ForeCyt? 上的預(yù)定義設(shè)門進行耗竭 T 細胞亞群的自動表型分析
最大程度減少樣本操作：小體積，單次清洗，無需稀釋
- 簡單的實驗方案，將細胞和上清液作為一個樣本，從而簡化了工作流程。
- 無需標(biāo)記或進行額外的優(yōu)化步驟。
圖 5a. 使用清晰易懂的方案，通過 iQue? 人 T 細胞耗竭分析試劑盒進行 T 細胞表型和細胞因子釋放分析。
圖 5b. 清晰易懂的改進方案，分析中允許包含靶細胞?？赏ㄟ^ iQue? 人 T 細胞耗竭分析試劑盒進行 T 細胞表型和細胞因子釋放分析。
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