抗體內化

抗細胞表面抗原的抗體可誘導內吞作用，這會導致此類抗體及與其偶聯(lián)的分子被細胞內化。該過程稱為抗體內化 (ABI)，已經在研究和臨床發(fā)現(xiàn)領域得到了廣泛應用，例如，通過抗體偶聯(lián)藥物 (ADC) 將劇毒藥物遞送至特定癌細胞，清除或降解癌細胞表面受體（如EGFR），以及通過抗體免疫療法識別腫瘤細胞以進行免疫細胞殺傷（如ADCC 或 ADCP）。

抗體作為疾病的有效治療方法在很多領域都具有治療意義，其中包括癌癥、自身免疫性疾病、心血管疾病、炎癥和傳染病。要開發(fā)供臨床使用的抗體，必須通過有效的體外功能檢測評估其潛在治療意義。傳統(tǒng) ABI 測定技術通常存在以下問題：

低通量采集，并且由于需要大量樣品，因此采樣時間比較長（如傳統(tǒng)流式細胞術）
檢測方法的設置復雜，需要優(yōu)化信號分辨率和補償
費力費時，需要抗體標記、優(yōu)化方案、固定和反復洗滌等步驟
需要手動執(zhí)行復雜的數(shù)據分析
大量使用珍貴樣品和抗體

iQue^?抗體內化檢測結合 iQue^? 抗體內化分析試劑盒與 iQue^?高通量流式細胞儀，簡化了高通量測定抗體內化的工作流程。借助集成式 iQue^? Forecyt 軟件，可以節(jié)省珍貴樣品、時間以及實現(xiàn)實時的藥理學分析。通過貼壁或懸浮細胞對一組抗體進行抗體內化量化從未如此簡單！

概念

圖 1.pH 敏感型熒光探針原理。

全新 pH 敏感型熒光探針能夠一步快速免洗標記含血清的完全培養(yǎng)基中的同型匹配抗體。內化抗體進入酸性內體和溶酶體途徑后，會產生熒光信號?？贵w內化量化為熒光探針檢測結果陽性的活細胞百分比。同時使用 iQue^? 細胞膜完整性染料測定細胞活力。

關鍵優(yōu)勢

最大程度地提高檢測效率?-?在高通量抗體發(fā)現(xiàn)過程中對一組抗體進行細胞內化測定
靈活的檢測形式 ?-?使用客戶指定的懸浮或貼壁細胞模型表征多種臨床人源化治療性抗體
?簡化數(shù)據采集和分析?-?快速收集和分析復雜數(shù)據，加快科學決策
以更少的樣品量獲得更多生物學洞察力?-?同時對在單個孔中共培養(yǎng)的不同類型細胞進行抗體內化評估，大幅減少樣品用量

最大程度地提高檢測效率

在單個孔中對一組抗體進行細胞內化測定，實現(xiàn)高通量抗體發(fā)現(xiàn)

圖 2.使用 iQue^? Forecyt^? 高效評估抗體活性。

抗體內化檢測使用了 T 細胞，在 384 孔板的每個孔中均生成了豐富的數(shù)據。使用抗體內化試劑標記了多種抗體，然后在同一孔中與 T 細胞共孵育。(A) 基于孔板的 T 細胞中不同抗體內化的 HeatMap，便于查看。(B) 系列稀釋曲線呈現(xiàn)了 T 細胞中多種標記抗體的內化曲線。

靈活的檢測形式

在 96 孔或 384 孔板中使用經驗證的試劑快速定量 ADCP，促進您的發(fā)現(xiàn)。

圖 3.非貼壁細胞和貼壁細胞類型的功能篩選和活性分析。

只需微調方案即可將該檢測方法用于貼壁細胞。圖中數(shù)據顯示了兩種治療性抗體（分別是懸浮 Ramos 細胞中的美羅華（抗 CD20）和貼壁 AU565 細胞中的赫賽?。?Her2））濃度與活性的關系，以及同時評估的細胞活力。將細胞接種到 96 孔板中，并加入 ABI 試劑和抗體復合物以及 iQue^? 細胞膜完整性染料，然后孵育 3 小時。懸浮細胞可以直接在 iQue^? 平臺上分析，而貼壁細胞需要在分析前仔細分離并重新懸浮。

簡化數(shù)據采集和分析

快速、輕松地收集、分析和展示復雜數(shù)據，加快科學決策

圖 4.Her2+ AU565 和 Her2- MDA-MB 468 細胞中的赫賽汀抗體內化。

將細胞接種到 96 孔板中，并使用與赫賽汀類型不同的抗體和 ABI 試劑（A：AU565，B：MDA-MB-468）的復合物進行處理。未在 Her2 細胞中檢測到內化。還對 AU565 中的赫賽汀進行了梯度稀釋曲線測定 (C)，顯示出不同的活性。

以更少的樣品量獲得更多生物學洞察力

同時對在單個孔中共培養(yǎng)的不同表型細胞進行特定抗體內化評估

圖 5.通過對在單個孔中共培養(yǎng)的細胞進行內化分析，僅需少量樣品即可獲得可靠數(shù)據。

將細胞接種到 96 孔板之前，使用不同濃度的無干擾型 iQue^? 細胞編碼染料（V/藍色）對細胞染色。將單獨培養(yǎng)的細胞和共培養(yǎng)的細胞放置一夜，使細胞貼壁。加入赫賽汀或 hIgG1 與抗體內化試劑的復合物，3 小時后使用 iQue^? 平臺執(zhí)行分析。通過散點圖 (A)，可以根據編碼染料輕松識別在同一孔中混合的全部三種細胞。可以對每個細胞群 (B) 執(zhí)行內化評估，盡可能從檢測抗體中獲取信息，同時最大程度地減少珍貴樣品和檢測抗體用量。