濃縮與透析
如果您培養(yǎng)細胞的目的是純化蛋白質，那么您一天的大部分時間都花費在過濾、提純和濃縮蛋白質上。長時間純化實驗期間，蛋白質可能在任何一步驟發(fā)生降解、沉淀或損失，因此，這些步驟將成為一大挑戰(zhàn)。選擇正確的工具可以提高效率，減少純蛋白和濃縮蛋白損失的幾率。
實驗中的每一步都可能減少您的蛋白產量：
- 細胞裂解期間的蛋白降解。細胞裂解和澄清上清液可能需要數(shù)小時，蛋白接觸蛋白酶可能會被截短或完全降解。
- 濃縮期間變干。成功完成純化步驟后，濃縮似乎變得瑣碎又無足輕重。但在未采取必要預防措施情況下，過快地旋轉樣品或旋轉時間過長，就可能在蛋白濃縮器中丟失蛋白。
- 透析期間的泄露。在長時間、多個步驟的透析期間，蛋白可能從透析袋或透析盒中泄露。特別是在持續(xù)多日的實驗期間，即使盒子完好，蛋白也可能會展開、重新折疊、聚合或發(fā)生水解。在最后一個階段失去蛋白特別令人沮喪。
保持蛋白質完整和加快凈化的工具：
處理分泌蛋白
使用分泌蛋白質可以避免混亂的溶解過程。此外，在純化過程中，蛋白質不會遇到細胞內蛋白酶。無論蛋白質是自然分泌，還是您優(yōu)化了細胞內的蛋白質，從而在HEK Freestyle或其它優(yōu)化的細胞系中進行純化，您都會面臨一系列不同的挑戰(zhàn)。例如，必須從量相對較大的上清液中分離出完整的細胞，并且必須濃縮蛋白樣品。
分離、透析和濃縮分泌蛋白的工具：
快速獲取有關細胞的真知灼見
如果細胞培養(yǎng)工作流程的目的是提供細胞生理上的相關信息，則需要正確的工具來對細胞進行成像和分析。最好的工具可提供可復制和信息豐富的分析，以幫助您快速洞悉結果并采用具有成本效益的方式公布結果。
細胞增殖
增殖是正常組織發(fā)育、再生和更新的基本機制。三種主要的生化細胞增殖試驗是基于DNA合成、代謝活動和ATP濃度，通常是結合在一起的單終點試驗，以提供時間過程數(shù)據(jù)。這些終點測量屬于間接方法，并且容易受到無法通過形態(tài)變化輕易驗證的偽影的影響。
通過活體細胞成像，在培養(yǎng)箱內連續(xù)進行細胞增殖試驗，如：無標簽融合測量和使用熒光標記的直接細胞計數(shù)。
細胞凋亡
細胞凋亡是正常組織發(fā)育和內穩(wěn)態(tài)的一個重要過程，在這個過程中細胞會及時發(fā)生程序性死亡。常用的細胞凋亡檢測方法包括使用酶標儀或流式細胞儀檢測caspase-37激活或PS外化的酶檢測方法。這些常見的檢測方法可得出單一的、用戶定義的終點測量結果，需要多個清洗步驟或細胞提升從而可能導致偽影，并且這些方法不適合長期測量，因為背景信號會隨著時間的推移而增強。
活細胞分析允許使用專用試劑同步、實時測量多種凋亡通路。然后，凋亡信號可以與相襯圖像相關聯(lián)，提供凋亡細胞死亡相關的其他生物學見解和形態(tài)學驗證。
細胞毒效應
細胞毒性是一個籠統(tǒng)的術語，描述了物質或環(huán)境變化對細胞健康的有害影響，這些影響可能危及代謝活動、抑制細胞生長或分裂，或最終導致細胞死亡。
許多細胞毒性試驗涉及到細胞膜完整性的測定，即使用無法滲透至健康細胞的染料，或者通過釋放死亡細胞標記物的方式。此外，代謝活動測量也被用來測定細胞毒性。然而，這些試驗很少涉及隨著時間的推移直接對死亡細胞的計數(shù)。
活細胞分析允許使用專用試劑實時測定基于細胞膜完整性的凋亡通路。死亡細胞的細胞核吸收一種被活細胞排除在外的惰性染料，熒光信號隨著時間的推移而增強，從而識別出死亡細胞。然后，細胞毒性信號可以與相襯圖像相關聯(lián)，提供凋亡細胞死亡相關的其他形態(tài)學驗證。
